新闻 关于我们 工作机遇 常见问题 联系方式 现场演示
在单细胞测序中使用Laminar Wash进行样品制备
了解更多(链接) 5min内完成细胞处理

单细胞基因组学和蛋白质组学发展迅速。《自然-方法》将单细胞多模态组学选为“2019年度技术”。随着越来越多的科学家使用单细胞技术,他们发现样品制备对于获得高质量的数据极其重要。


单细胞测序和蛋白质组学可能会因为细胞团块、未完全洗涤而残留的cfNAs,以及较少细胞数量下较差的保留率而导致数据质量不佳。离心洗涤会对样本中的细胞产生压力,导致错误的基因表达结果。


单细胞基因组学和蛋白质组学中样本制备一步是极其重要的,特别是对于单细胞基因表达和免疫分析。在这个领域中,mRNA转录物被标签化,细胞会经历mRNA泄露(背景增加)或mRNA降解(信号降低)。与流式细胞仪不同的是,单细胞测序中不可能圈除细胞碎片或细胞群。细胞制备必须尽可能干净,并且由单个细胞组成。


10X Genomics公司的Sample Preparation Demonstrated Protocol Fresh Frozen Human Peripheral Blood Mononuclear Cells for Single Cell RNA Sequencing (Part Number CG00039 Rev C)使用离心法洗涤细胞,同时警告“但是,不要过度离心,离心速率的增加会使细胞完整性和活性受到损坏”。所以,如果有一种温和的方法来洗涤细胞会很有意义,并且科学家们就应该使用这种方法。 使用层流洗涤系统,科学家们可以节省时间并减少人工操作。


层流洗涤系统不会对细胞产生压力,从而不会影响基因或蛋白表达、细胞完整性及活性。

优势包括:

双峰分离优于离心法,可以得到更优越的数据

层流洗涤比离心更快

无需通过离心收集细胞

减少细胞碎片

细胞团块最小化

使用Laminar Wash进行核分离

管中加入裂解液批量裂解PBMC,洗涤缓冲液淬灭反应并离心。细胞或者在管中进行进一步的两次洗涤,或者将细胞铺到Laminar Wash96孔板中沉降20min,用PBS+0.04%BSA缓冲液 Laminar Wash HT1000仪器洗涤7次。



离心的样品保留率不一致,例如有大的团块。使用层流洗涤系统洗涤时细胞核会更加清晰。层流洗涤系统的保留数更高更一致。

T细胞刺激动力学中IL7的有效洗涤

清洗彻底对单细胞基因组学分析至关重要。下图说明了去除IL7后通过Stat5的磷酸化的定量来研究IL7信号衰减动力学的测定方法。这个实验的难度在于,T细胞对微量的IL7也极其敏感。离心洗涤需要的时间很长(3循环全稀释),对细胞还会产生压力。层流洗涤系统HT1000通过去除IL7后磷酸化Stat5的降解速度更快说明,在不到5分钟时间即可有效去除IL7(18x清洗)。


你是如何制备你的单细胞测序的样品的呢?

通过观看这个4min的视频或浏览微型层流洗涤信息来获取更多层流洗涤系统的信息


Laminar Wash MINI是单细胞测序实验的完美弥补工具


来自10xGenomics关于样品制备的一些有用的信息

咨询我们的应用科学家