即将举行的网络研讨会：实现无需离心的流式细胞术样品制备工作流程的标准化
关于流式的干货：
当你做实验或阅读文献时，你经常会遇到流式细胞术或流式图片。目前，流式细胞术应用于分析细胞表面和细胞内分子表达特征，定义不同的细胞群，确定分离亚类的纯度，分析细胞的大小和总量，可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测抗体上标记的抗体的荧光强度，可以检测具有特异性结合的分子，如T细胞表面的TCR受体。这里是为了推广一些与流动有关的知识。
流式细胞仪的原理
流式细胞术的原理是将针对特定分子的荧光单克隆抗体添加到混合细胞组中，并且该特定单克隆抗体与其相应的抗原靶分子结合。当用仪器的激光束照射每个细胞时，细胞上携带的荧光被相应的激光束激活，并且发射相应的荧光。来自细胞表面的荧光可由灵敏的光电倍增管检测。
在流式细胞术分离装置中，不同的细胞亚群由于标记不同的荧光抗体而携带不同的物理(粒度，密度，荧光强度)信息，从而从混合细胞群中分选出靶细胞。
适用于流式检测的样品类型:单细胞悬液
外周血、骨髓、灌洗液、腔积液、培养细胞系等
如果是脾脏、肝脏和其他实体器官，需要切碎，消化成单细胞悬液，进行下一次实验。
流式染色的步骤包括：
将培养的细胞或组织样品制成单细胞悬浮液，然后将细胞置于流管或EP管中，用于与荧光标记或未标记的抗体一起孵育(在冰上孵育，在室温孵育，取决于抗体)。37°孵育，详见抗体。然后将细胞置于流式细胞仪中进行分析。
常见的染色方法：
直接染色：
在直接染色中，细胞与直接结合荧光染料如fitc的抗体一起孵育。它的优点是只需要一个抗体孵育步骤，消除了二抗非特异性结合的可能性。
间接染色：
在间接染色中，没有荧光的一抗识别目标分子，有荧光的二抗识别一抗，从而达到检测目标分子的目的。或者，可以使用亲和-生物素系统，即抗体与生物素结合，并被荧光染料标记的抗生物素蛋白检测。
选择荧光结合染料
不同的荧光染料的亮度有强有弱，强弱的相对比较差异主要取决于你的仪器，这是我们因为在不同的仪器上激光和过滤器的组合进行差异。不同的仪器分析检测的荧光通道稍有了解不同，所以可以染色技术之前一定要先查好你要用的仪器设计适合作为检测的荧光染料。
使用流式传输注意：
使单细胞悬浮液尽可能减少细胞粘附;
尽量保持细胞的活性，既可以减少非特异性染色，又可以继续后续实验。
