即将举行的网络研讨会：实现无需离心的流式细胞术样品制备工作流程的标准化
免疫荧光染色的介绍
免疫细胞化学基于抗原抗体反应的原理。免疫荧光染色首先用荧光素标记已知的抗原或抗体，制成荧光标记物，然后用荧光抗体(或抗原)作为分子探针，检查细胞或组织中相应的抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原-抗体复合物含有荧光素。用荧光显微镜观察标本时，荧光素在激发光的照射下发出明亮的荧光(黄绿色或橙红色)。免疫荧光染色可以看到荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和位置，通过定量技术确定含量。免疫荧光也叫免疫荧光染色。荧光实验的原理是将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应的抗原反应。其优点是方法简单，特异性高，非特异性荧光染色少，标记抗体用量相对较大。抗原-抗体反应用于定位组织或细胞中的抗原物质。
下面详细描述免疫荧光染色的步骤:
1.将0.01mol/L ph 7.4的PBS滴在待测样品上，10分钟后弃去，使样品保持一定的湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记抗体溶液至完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒中，保温一定时间(参考:30min)。
3.取出载玻片，放在载玻片架上，用pH7.4的0.01mol/L PBS冲洗，然后依次浸泡在三缸pH7.4的0.01mol/L PBS中，每缸持续3-5 min，不时摇动。
4.取出载玻片，用滤纸吸干多余的水，但不要使标本变干，加入一滴缓冲甘油并用盖玻片盖住。
5.免疫荧光染色立即用荧光显微镜观察。观察标本的特定荧光强度，一般可用“+”表示:(-)无荧光;(正负)微弱的可疑荧光;(+)荧光微弱，但清晰可见;(++)明亮的荧光;(++++-++)荧光且有光泽。当待检标本的特异性荧光染色强度达到“++”或以上，各种对照显示(+)或(-)，即可判定为阳性。
